ANII | Agencia Nacional de Investigación e Innovación

La capacidad de determinar la estabilidad de macromoléculas biológicas en ensayos miniaturizados, por nano Fluorimetría Diferencial de Barrido, se basa en el rastreo ágil de gran número de condiciones, herramienta fundamental en bioquímica y biofísica de proteínas. Resulta esencial para identificar las condiciones óptimas de purificación y almacenamiento de proteínas (rastreando parámetros como fuerza iónica, pH, naturaleza del tampón, ligandos, detergentes, etc), en forma miniaturizada y elevado de número de muestras en paralelo. Estos rastreos son previos y en preparación a la utilización de una gran variedad de técnicas bioquímicas y biofísicas, típicamente mejorando, y sustancialmente, la performance de las mismas. Entre muchas otras aproximaciones beneficiadas se pueden citar la enzimología con proteínas puras, microscopía electrónica 3D, ingeniería de proteínas y uso de mutantes, cristalografía, RMN y análisis de interacciones macromoleculares. Teniendo en cuenta las revoluciones tecnológicas en marcha a nivel global en las áreas de crio-microscopía electrónica y en estudios moleculares de proteínas de membrana, la tecnología central de esta propuesta hará disponible en Uruguay una plataforma que mejorará la calidad de las muestras de macromoléculas, maximizando las tasas de éxito en análisis estructurales subsiguientes. El proyecto actual permitirá la adquisición de un equipo con la tecnología de punta, su instalación y entrenamiento del personal a cargo. Durante el primer año se realizarán ensayos de puesta a punto de la tecnología dirigidos a i- aumentar la cristalizabilidad de proteínas de interés, y ii- mejorar la solubilidad de especies proteicas por ingeniería de proteínas; se pasará luego iii- al trabajo de rutina, permitiendo la evaluación de calidad y estabilidad de proteínas recombinantes de grupos de investigación y laboratorios biotecnológicos, la solubilización de proteínas recalcitrantes por replegado, y la contribución en estudios de comparabilidad de biofármacos, usando mínimas cantidades de productos biológicos.